既生瑜，何生亮？同是 pDＮA 纯化有什么大不同

发布时间：2019-11-28 21:33 | 点击次数：2213

三国时代，诸侯争霸，群雄逐鹿

周瑜更是风度翩翩、文武双全，

全江东公瑾女孩的老公，

只可惜，到底诸葛孔明略胜一筹，

公瑾最终饮恨江东。

pDＮA的纯化方案已经日渐成熟，

常规方法亦可以满足目前的需求，

奈何，偏偏又冲出一匹黑马，

以“省时、省力、省钱”获得业内人士交口称赞

虽然常规方法还算出色，

但依然不禁让人发出“既生瑜何生亮”之叹。

话说这位洋“孔明”，生于一户洋人家族：

BIA Separations，

更有一个洋气的名字：

BIA•整体柱•pDＮA纯化方案

对决：今天小编就带大家来看一场高手之间的

周瑜－常规方法

诸葛孔明－BIA•整体柱•pDＮA纯化方案

	周瑜－常规方法	诸葛亮－BIA整体柱纯化	整体柱纯化方案的优势
纯化步骤及流程对比
步骤	三步法	两步法	þ 步骤少 þ 裂解流程更加符合药品的生产标准 þ 纯化后的质粒纯度一样 þ 减少了分子筛的需求 þ 省时、省力、省钱
优化的前期处理	必须要用中空纤维柱浓缩样品	碱裂解法，CaCl2沉淀蛋白质和RNA
第一步	分子筛：去除RNA，同时将缓冲液置换为疏水柱缓冲液
第二步	疏水柱：分离开环DNA	DEAE离子柱：分离去除RNA，杂蛋白，内毒素等
第三步	离子柱：分离杂蛋白，内毒素等	C4柱：分离开环DNA
纯化成本对比（以200mg最小规模为例）
所需耗材	10L分子筛	80ml套装柱	þ 总体成本可降低50% þ 规模越大，成本降低越多 þ GMP级别的接头，更符合GMP标准 þ 轻松放大，避免了装填验证带来的烦恼
	100ml疏水柱
	100ml离子柱
GMP接头	1L以下的层析没有GMP级别的接头，不符合GMP的标准。	从8ml开配有GMP级别的接头
纯化效果（相同的纯化体积，相同的洗脱方法，相同上样体积）
第一步效果		第一步DEAE离子柱纯化的效果，质粒的纯度已经达到90%以上	不言而喻
疏水柱	常规疏水柱回收率和纯度不如BIA的C4整体疏水柱	C4整体疏水柱的回收率和纯度要高于常规疏水柱	不言而喻